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你未必知道的ELISA實驗秘訣
更新時間:2021-01-27   點擊次數(shù):853次
  你未必知道的ELISA實驗秘訣
  只有不斷學習與實驗才能逐漸積累經(jīng)驗,做出更好的實驗效果。在前面的資訊內(nèi)容及技術(shù)文章中,為大家分享許多ELISA試劑盒的操作技巧、要求、方法等相關(guān)技術(shù),我公司技術(shù)員根據(jù)自身多年【ELISA試劑盒實驗】經(jīng)驗,整理出新的ELISA操作技巧。下面我們一起來看下具體內(nèi)容,你未必知道的ELISA實驗秘訣:
  1.加樣后及時放人孵箱,標本較多時,要分批操作。按說明步驟嚴格控制操作時間,防止孵育時間人為延長,導致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。
  2.顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用。
  3.加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
  4.合理安排檢測量,以免反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。
  5.液體全部加入酶標孔后,*好將酶標板放在桌子上平行輕輕搖晃30s,使液體充分混合均勻,也使其得到充分的反應(yīng)。
  6.洗液不夠時,可用蒸餾水自行配制PH7.4,0.02M的磷酸緩沖液,加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長期保存。
  7.吸取液體時,要用量程和需要量接近的槍去吸,減少誤差。
  8.要盡量做雙孔實驗,這樣才既能保證數(shù)據(jù)的準確性,又能反映出試劑盒的精密度。
  9.為防止樣品蒸發(fā),試驗時將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi),酶標板加上蓋或覆膜。
  10.未使用完的酶標板或者試劑,請于2-8℃保存。辣根過氧化物酶標記抗人IgG工作液請依據(jù)所需的量配置使用。請勿重復使用已稀釋過的辣根過氧化物酶標記抗人IgG工作液。
  11.作時必須戴手套,穿工作衣,嚴格健全和執(zhí)行消毒隔離制度。
  12.試驗結(jié)果的判定必須以酶標儀讀數(shù)為準。
  13.樣品稀釋液應(yīng)用加液器加注,并經(jīng)常校對其準確性。
  14.剩余樣品及廢棄物應(yīng)經(jīng)121℃高壓蒸汽滅菌30分鐘,或用5.0g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30分鐘后廢棄。
  15.不同批號試劑組分不得混用。
  16.ELISA試劑盒實驗洗滌時各孔均需加滿液體,防止孔口有游離酶不能洗凈。
  17.用于檢測的樣品應(yīng)保持新鮮。
  18.用戶在初次使用試劑盒時,應(yīng)將各種試劑管離心數(shù)分鐘,以便試劑集中到管底。
  19.每次實驗留一孔作為空白調(diào)零孔,該孔不加任何試劑,只是*后加底物溶液及2N H2SO4。測量時先用此孔調(diào)OD值至零。
  20.要確保微量加樣器的準確性,可以使用蒸餾水和電子天平進行確定(由于蒸餾水不含雜質(zhì),溫度環(huán)境為20%左右時,lmL的水可以看作是lg、200 L的水可以看作是0.2g)每一把微量加樣器都應(yīng)該將其*高量程和*低量程進行確定。
  21.在使用微量加樣器時,吸取不同瓶子中液體后要更換槍頭,即使吸取標準品溶液。
  22.吸取液體時速度不易太快,以免產(chǎn)生氣泡,吸取的量不夠準確。
  23.將液體加到酶標孔中時,避免槍頭和孔內(nèi)液體接觸,可使槍頭上的液滴和孑L壁接觸,液滴會自然流下去。吸入液體時的*好的方法是吸兩檔打一檔,防止由于槍頭的毛細作用使得部分液體不能流出而造成的誤差。
  24.吸取液體時要選用量程和需要量接近的微量加樣器吸,減少誤差。
  25.實驗前30min將試劑盒中的所有試劑從冰箱取出,使試劑盒中的所有試劑與提取好的樣品溶液的溫度相同,酶標板只要取出所需量。
  26.由于底物顯色劑對光及其敏感,因此要避光保存。
  27.手工洗板時每次加入洗滌液后。應(yīng)靜置15~30s,不要將一個酶標孑L中的洗滌液濺入另一酶標孔中,防止交叉污染。甩去洗滌液后將酶標板放在毛巾或吸水紙上拍干。
  28.檢測吸光度前應(yīng)將酶標儀打開,將其預熱30min以上。
  29.底物為TMB,避免與皮膚相接觸。終止液為2tool的濃硫酸具有腐蝕性,應(yīng)盡量避免接觸皮膚。
  30.孵育的時間應(yīng)該嚴格按照試劑盒說明書上的時間為準。
  31.對樣本的結(jié)果有疑問時需要使用其他檢測方法進行驗證。
  32.沒有去離子水或雙蒸水時,可以使用娃哈哈純凈水配制溶液,切勿使用自來水。
 

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