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大腸桿菌檢測方法
更新時(shí)間:2011-10-08   點(diǎn)擊次數(shù):4697次

一:進(jìn)入無菌室步驟
1、進(jìn)入無菌室前應(yīng)打開紫光燈進(jìn)行滅菌,時(shí)間為0。5—1小時(shí)。
2、關(guān)燈后0•5小時(shí)后放可進(jìn)入。
3、進(jìn)入更衣間更換衣服,佩帶口罩、帽子、鞋套。
二:實(shí)驗(yàn)步驟
1、進(jìn)入無菌室后,先把酒精燈點(diǎn)燃,然后在用酒精棉進(jìn)行手部消毒。(酒精棉是用75%的酒精加入脫脂棉中制成)。
2、準(zhǔn)備雙料管3根,單料管6根,培養(yǎng)皿7個(gè)。
3、直接從原液中吸取10ml放入雙料管,(3根每根各10ml)。
4、再吸取原液1ml放入單料管中(3根每根各1ml)。
5、再吸取原液1ml放入培養(yǎng)皿中(2個(gè)培養(yǎng)皿各1ml)。
6、再吸取原液1ml放入鹽水管中制成-1梯度的樣液 。
7、更換一根吸管,從-1梯度的樣液吸取1ml樣液放入單料管中(3根每根各1ml)
8、再吸?。?梯度樣液1ml放入培養(yǎng)皿中(2個(gè)培養(yǎng)皿各1ml)
9、再把每個(gè)培養(yǎng)皿中到入營養(yǎng)瓊脂平鋪底部搖允(注另作3個(gè)培養(yǎng)皿:空氣空白,把培養(yǎng)皿打開十分鐘倒入營養(yǎng)瓊脂平鋪底部搖勻。瓊脂空白,把培養(yǎng)皿中倒入營養(yǎng)瓊脂平鋪底部搖勻。鹽水空白,吸1ml生理鹽水放入培養(yǎng)皿中,倒入營養(yǎng)瓊脂平鋪底部搖勻)。
10、把全部作好的放入培養(yǎng)箱中,溫度36C+-1×C,大腸24H+-2H,菌落48H+-2H,(待培養(yǎng)皿中的瓊脂凝固后反轉(zhuǎn)過來放入培養(yǎng)箱中)
11、梯度:-1梯度為1ml原液加入9ml生理鹽水配成-2梯度為1ml-1梯度樣液加入9ml生理鹽水配成-3梯度-4梯度配制方法和-1、-2梯度的配制方法一樣。
12、如果大腸初發(fā)酵產(chǎn)生氣泡,用接種筆沾一個(gè)產(chǎn)氣的液在伊紅美蘭平板上畫之字形然后放入培養(yǎng)箱中36C,24H+-2H 。(接種筆在每次使用前必須在酒精燈上消毒。所畫之形不能劃破伊紅美蘭瓊脂表面)。
13、取出后在用接種筆在伊紅美蘭平板之字形上挑菌,放入乳糖復(fù)發(fā)酵管中 ,然后再培養(yǎng)36C+-1C,24H++-2H。
14、再在伊紅美蘭平板之字形上挑菌,放到載玻片上作鏡檢。(方法見標(biāo)準(zhǔn))。
15、只有鏡檢成紫紅色和乳糖復(fù)發(fā)酵管產(chǎn)氣同時(shí)成立的情況下,才能斷定這根管是不合格。
16、清洗消毒這根試管前必須進(jìn)行消毒霉菌,121C,0。5小時(shí)同時(shí)不能放氣。

 

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