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人過氧化物酶體增殖物激活受體α試劑盒實驗檢測
更新時間:2015-04-07   點擊次數(shù):592次

人過氧化物酶體增殖物激活受體α試劑盒實驗檢測

本試劑盒僅供研究使用。

檢測范圍:96T
10ng/L - 320ng/L

使用目的:本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α)含量。

實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中人過氧化物酶體增殖物激活受體PPAR-α水平。用純化的人過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α),再與HRP標記的過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中人過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α)濃度。

標本要求

1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

操作步驟

標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

320ng/L5號標準品150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液

160ng/L4號標準品150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液

80ng/L3號標準品的4號標準品加入150μl標準品稀釋液

40ng/L2號標準品150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液

20ng/L1號標準品150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

加樣:人過氧化物酶體增殖物激活受體PPAR-α分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  
配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
溫育:操作同3。
洗滌:操作同5。
顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

注意事項

1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。

3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。

請每次測定的同時做標準曲線,做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物請避光保存。

7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9.本試劑不同批號組分不得混用。

10.人過氧化物酶體增殖物激活受體PPAR-α如與英文說明書有異,以英文說明書為準。

保存條件及有效期

1.試劑盒保存:;2-8℃。

2.有效期:6個月

 

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