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ELISA試劑盒法檢測研究
更新時(shí)間:2016-09-08   點(diǎn)擊次數(shù):823次

ELISA試劑盒法檢測研究
基因已經(jīng)整合到銀耳基因組中;RT-PCR結(jié)果顯示,在銀耳細(xì)胞中可以動(dòng)物ELISA試劑盒檢測到人胰島素基因的mRNA;Southern雜交結(jié)果表明人胰島素基因以單拷貝的形式整合到銀耳基因組DNA中。本試驗(yàn)通過設(shè)置農(nóng)桿菌與銀耳芽孢不同共培養(yǎng)時(shí)間、誘導(dǎo)劑乙酰丁香酮的濃度、銀耳芽孢及農(nóng)桿菌ELISA試劑盒濃度等因素對轉(zhuǎn)化效率影響,結(jié)果在乙酰丁香酮濃度為500μmol/mL、銀耳芽孢濃度為108個(gè)/mL、農(nóng)桿菌OD=0.5及共培養(yǎng)時(shí)間為2d時(shí),轉(zhuǎn)化效率zui高,為310個(gè)轉(zhuǎn)化子/108個(gè)銀耳芽孢。轉(zhuǎn)化子轉(zhuǎn)接5代后對潮霉素仍有抗性,說明外源基因在銀耳芽孢中能夠不亂遺傳。在實(shí)驗(yàn)室已初步建立的農(nóng)桿菌EHA105介導(dǎo)銀耳轉(zhuǎn)基因方法的基礎(chǔ)上,ELISA試劑盒以銀菌株Tr21-01為出發(fā)菌株,通過凍融法將攜帶有潮霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶(Hph)基由于遺傳標(biāo)記及人胰島動(dòng)物ELISA試劑盒素基因(BAC)為目的基因的質(zhì)粒pBHg-BCA導(dǎo)入根癌農(nóng)桿菌GV3101,LBA4404和AGL-1中,并進(jìn)一步介導(dǎo)轉(zhuǎn)究。實(shí)驗(yàn)結(jié)L-1具有較高的轉(zhuǎn)化率;GV3101轉(zhuǎn)化率較低,且假陽性較高;LBA4404無抗性菌落長出。此結(jié)果表明不同的農(nóng)桿菌侵染銀耳芽孢能力具有差異性,且對受體侵染具有一定的特異性。本實(shí)驗(yàn)以農(nóng)桿菌EHA105為參照菌株,ELISA試劑盒對農(nóng)桿菌AGL-1介導(dǎo)轉(zhuǎn)化銀耳進(jìn)行研究?;谵r(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)基因受諸多因素的影響,本實(shí)驗(yàn)從農(nóng)桿菌與銀耳芽孢共培養(yǎng)時(shí)間、銀耳芽孢濃度、農(nóng)桿菌濃度、誘導(dǎo)劑乙酰丁香酮(AS)的濃度、轉(zhuǎn)率等方面進(jìn)行優(yōu)化。其轉(zhuǎn)化前提優(yōu)化結(jié)果為:AGL-1菌液OD值為0.4~0.5,AS誘導(dǎo)培養(yǎng)濃度為250μg/mL、共培養(yǎng)濃度為150μ耳芽孢濃度為10~8/mL,共培養(yǎng)72h轉(zhuǎn)化率zui高,可達(dá)500個(gè)/10~8,且陽性菌落為89%;EHA105菌液OD值為0.4~0.5。ELISA試劑盒

 

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